以mRNA序列设计的引物扩增以cDNA为模板的序列得到的是什么?

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• 引物设计问题,以mRNA序列设计引物,然后用cDNA为模板来扩增,在设计引物时mRNA序列是否要反转序列?我想的是,不反转的话设计的引物是和mRNA互补的,而mRNA合cDNA,这样的话设计的引物就不和cDNA互补了,是不是这样子呢?
• 关于PCR产物的理解既然CDNA无内含子和外显子的区别,那么以它为模板扩出的目的基因的序列不就也没有内含子和外显子的区别,那扩增的这个基因不就错了吗?请问我这么理解哪里出错了?请不要复制大片的文章,
• 我提取RNA,反转录得到cDNA,我要由此扩增功能基因,请问引物设计时,用查到的mRNA序列,还是用cDNA序列我要克隆一个基因,从NCBI查到该基因近似物种的mRNA(没有查到cDNA).我的路线是先提取RNA,反转录成为cDNA,由cDNA进行PCR,得到该基因.但是,在引物设计时,我不清楚是应该用近似物种的mRNA序列进行设计,还是用cDNA序列进行设计.如果用cDNA序列进行设计的话,我是否只需用在线工具转换一下即可?
• 2012新课标卷第40（4）反转录作用的模板是MRNA,产物是CDNA.若要在体外获得大量反转录产物,常采用PCR技术.这里用PCR的原料是反转录后的DNA还是直接以MRNA为原料?若以MRNA为原料会得到什么?很迷茫
• 已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求!我目的片段大小为2800,载体为eGFP-N1,设计引物中,我是取了ATG开始的前20个左右的碱基,加入酶切位点和保护碱基,后面是取了去掉终止密码子的互补序列,加入酶切位点和保护碱基……（问题：1、除了酶切位点和保护碱基,还有什么需加入什么吗?2、需要在上游序列中加入KOZAK序列吗?其作用是什么?下游也需要吗?3、酶切位点的保护碱基是特定的吗?4、克隆目的基因,必须从ATG开始设计上游引物,终止密码子设计下游引物吗?可不可以从中间或者两侧设计?因为位置若固定的话很难找到合适的引物）……十分紧急,
• PCR扩增时RNA引物序列设计时,引物序列是与目标基因前的序列互补呢,还是与目标基因互补?我也遇到了这样的问题,做负链RNA病毒RT-PCR的时候,我不知道以哪个为模板设计引物,是用原始序列设计还是原始序列的互补序列设计?
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• 实时荧光定量PCR的一点问题定量PCR实验步骤（以mRNA为例）：1.设计实验方案：例如对样品、实验组和对照组的一个实验流程设计2.引物和探针的设计和合成3.抽提RNA,测定提取的RNA的浓度4.反转录PCR5.定量PCR6.数据分析为什么在步骤中要抽提RNA,并要反转录PCR 为什么不能直接扩增 mRNA 而要反转录之后扩增cDNA?
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