PCR扩增时RNA引物序列设计时,引物序列是与目标基因前的序列互补呢,还是与目标基因互补?我也遇到了这样的问题,做负链RNA病毒RT-PCR的时候,我不知道以哪个为模板设计引物,是用原始序列设计还是原始序列的互补序列设计?
问题描述：
PCR扩增时RNA引物序列设计时,引物序列是与目标基因前的序列互补呢,还是与目标基因互补?
我也遇到了这样的问题,做负链RNA病毒RT-PCR的时候,我不知道以哪个为模板设计引物,是用原始序列设计还是原始序列的互补序列设计?
答
如果你拿到的序列是RNA病毒的RNA序列，那这段序列就是正义链，就根据这段序列直接把U变成T，设计引物就对了。没有问题。
答
做逆转录，设计的引物一定要与模板互补。比如负链RNA，设计引物时，就要以负链为模板，首先把RNA逆转录成cDNA。
答
与目标基因前的序列互补,你的引物的目的是扩增出目的基因,当然是要用基因前的序列作为模板了,自己再仔细想想
答
你设计的应该是一对，所以没任何关系