实时荧光定量PCR的一点问题定量PCR实验步骤（以mRNA为例）：1.设计实验方案：例如对样品、实验组和对照组的一个实验流程设计2.引物和探针的设计和合成3.抽提RNA,测定提取的RNA的浓度4.反转录PCR5.定量PCR6.数据分析为什么在步骤中要抽提RNA,并要反转录PCR 为什么不能直接扩增 mRNA 而要反转录之后扩增cDNA?
问题描述：
实时荧光定量PCR的一点问题
定量PCR实验步骤（以mRNA为例）：
1.设计实验方案：例如对样品、实验组和对照组的一个实验流程设计
2.引物和探针的设计和合成
3.抽提RNA,测定提取的RNA的浓度
4.反转录PCR
5.定量PCR
6.数据分析
为什么在步骤中要抽提RNA,并要反转录PCR
为什么不能直接扩增 mRNA 而要反转录之后扩增cDNA?
答
这样可以测量某个基因的表达量
实时荧光定量PCR的实验设计是根据你自己实验需要而定，并不是非要抽提RNA。你也可以用质粒DNA等做模板。从你的实验需求出发
答
实时定量目的就在于测定样品mRNA水平的含量啊!要获取扩增反应之初的模板量,必然要先提取总RNA,用多聚T引物将全部的mRNA反转录得到cDNA作为模板,再通过后续检测得出结果.