如何通过已知的引物序列查询基因的全序列

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• dna序列转换成蛋白序列已知基因的DNA序列 cdna序列,如何得到蛋白序列呢?用DNAman可以么?或NCBI上?如何操作呢?这样得出的蛋白序列是唯一的吗?不考虑蛋白的空间结构啥的么?
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• 有一已知序列（1516bp）的基因,现在想要克隆这个基因,请问引物怎样设计?能不能直接克隆出全长?还有就是,一般所说的启动子,终止子在什么位置?如果要设计酶切位点的话该怎么办?我是菜鸟,刚接触这块,下面是这个序列：5'GGCACGAGGATTCAATTCAATACGAAACTTATCTCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAATTCAATACGAAACTCCATTTTTAATTTATTATTGGTCAGTTAAATTTGAGGTGAAATTATCCACCCCCATTTTTGACTCACTTGCGTTGTAGCCGAATTTCAAAAATGGTAGAATCAACAACAACCCAGATGAATTAGTGAGCGAAAAATCGAAGATATTGCTTATCCAATAGTAAAGATTCAATTTTTAGTGCATTAACAACAATGGGTTCTGGAGAAATAGCTTCTTCATCTGGAAACACTAACGTTTCTAGCTCAGGGCTTATTGAAAAGCACCAATTGGAGCTAGAC
• 如何让设计引物有一段基因序列,想做表达,设计引物是直接根据这段基因序列设计吗?还是查找出这段基因的ORF,根据这段ORF的基因序列设计引物啊
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• 已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求!我目的片段大小为2800,载体为eGFP-N1,设计引物中,我是取了ATG开始的前20个左右的碱基,加入酶切位点和保护碱基,后面是取了去掉终止密码子的互补序列,加入酶切位点和保护碱基……（问题：1、除了酶切位点和保护碱基,还有什么需加入什么吗?2、需要在上游序列中加入KOZAK序列吗?其作用是什么?下游也需要吗?3、酶切位点的保护碱基是特定的吗?4、克隆目的基因,必须从ATG开始设计上游引物,终止密码子设计下游引物吗?可不可以从中间或者两侧设计?因为位置若固定的话很难找到合适的引物）……十分紧急,
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