如果要使用PCR扩增一段已知的DNA序列,要如何设计引物
问题描述：
如果要使用PCR扩增一段已知的DNA序列,要如何设计引物
答
可以找公司合成
答
在指定的DNA序列上找一小段（一般18-30碱基）序列，一般要求GC含量在40-60%之间，没有错配和发夹结构（delta G绝对值越小越好），如果成对设计，要求正负引物Tm值相近
答
把这段基因输入设计软件里,调节引物位置,使变性温度在94度,退火温度=Tm-（5到10度） 延伸温度72度左右,满足这些条件基本就可以了,当然还要根据实际情况多次实验得到最佳引物.如果你要扩增整个的基因,引物必须要在起始密码子之前,或包含起始密码子.最后加上酶切位点就可以了.