PCR中 “扩增循环阈值”

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• 在DGGE实验中,胶回收后要测序前的PCR扩增时引物必须为不带GC夹子的吗?我用带GC夹子在DGGE实验中，胶回收后要测序前的PCR扩增时引物必须为不带GC夹子的吗？我用带GC夹子的扩增了，有三个条带已送测序公司测序，得到了序列。结果能用吗？
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• PCR仪的使用,以下的一些数据帮解释下首先是 ①94℃→5min  这个目的是干嘛?            ②94℃→30s    这个目的是什么?            ③56℃→30s    这个目的是什么?            ④72℃→30s    这个目的又是什么?            （第二步到第四步要重复30次,这个目的是什么?）            ⑤72℃→3min   这个目的又是什么?            ⑥4℃→∞           这个目的又是什么?     以上是遗传学实验：利用分子标记对三系杂交水稻分型实验中PCR扩增环节,老师给出的步骤,不是很理解,希望高手给解释下     加入的酶是最适温度在72摄氏度的TaqE酶,最终需要得到和标记的目的基因应该是水稻细胞线粒体中的ORFHL79      但DNA是老师现成给的,所以不清楚是整个细胞所有DNA的混合物,还是已提纯的目的基因     不知道这对上面的分析是否会有影响,所以也提了一下      
• overlap 一、用这对引物A1-F：gggggcccccaggctgacttaccagtccgccacctttgA2- R：gatgacctcctcgcccttgctcaccatggtgcgcgcattggggcgccgggaag扩增出片段A,产物长2540bp左右[color=Red]已割胶回收,即片段A二、用这对引物B1- F：tcttcccggcgccccaatgcgcgcaccatggtgagcaagggcgaggaggtcatcB2- R：cggatatccgatacattgatgagtttggacaaaccac扩增出B片段,产物长1680bp已割胶回收,即片段B三、把一、二步中得到的PCR产物A、B通过overlap PCR连接起来,产物长4200bp左右使用引物：A1-F：gggggcccccaggctgacttaccagtccgccacctttgB2- R：cggatatccgatacattgatgagtttggacaaaccac就在这一步问题出现了,就是这步做了N多次,就是P
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• 海像一面明亮的镜子,反映着天空柔和的蓝色.造一句相仿的句子
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