DDRT-PCR的随机引物是怎么设计的?
问题描述：
DDRT-PCR的随机引物是怎么设计的?
没做过,不太懂这个,文献都只说随机引物,没说这个随机引物是怎么生成的?看的很困惑
你这说的是锚定引物啊，不是随机引物呢，我晕了，那什么是锚定引物呢？
答
反转录的差异显示PCR不同于DNA直接进行PCR.
首先,我们需要扩增的是DNA,反转录酶是必须的.
楼主应该知道,DNA的PCR不像体内DNA合成那样,体内合成需要RNA引物,而体外是不需要RNA引物,而是随机引物.
这里的随机引物要从这几个方面来理解.
1）mRNA有Poly-A尾巴,我们可以合成一段Poly-T作为引物
2）有一个矛盾需要解决,就是Poly-A的尾巴长度是不确定的,如何确定引物Poly-T的长度呢?这个没有具体限制,实验中发现,不低于10个都是没有问题的.
3）仅仅如此时不够的,这样做得来的DNA肯定会长短不一,所以,在Poly-T后面再增加一般是2个碱基,那么,引物总共可设计的就有12种（为什么是12种楼主自己去看,我就不多说了）.这就叫随机引物.
同学,锚定引物PCR是用于扩增已知序列的DNA,根据其一端已知的序列设计好引物,这个引物不是多聚T或者多聚A之类的了,是已知的.
如,要扩增ATGCCGTGCG……,我们就设计引物TACGGCACGC……
明白了吧,