荧光定量PCR引物设计本人在做荧光定量PCR之前,先用Primer 3.0设计了目的基因的引物,用于半定量PCR,而且也把引物放入NCBI中进行了blast比对,得到引物为特异性引物,半定量PCR效果也跟预期一样,电泳仅出现目的带,接着我准备用sybr green 做荧光定量PCR,不知道可不可以就用我现在设计的这个引物去做?因为目的基因是多基因家族,所以在设计引物时我是在3非翻译区设计的引物,不知道荧光定量PCR中,此引物还可不可以用?
问题描述：
荧光定量PCR引物设计
本人在做荧光定量PCR之前,先用Primer 3.0设计了目的基因的引物,用于半定量PCR,而且也把引物放入NCBI中进行了blast比对,得到引物为特异性引物,半定量PCR效果也跟预期一样,电泳仅出现目的带,接着我准备用sybr green 做荧光定量PCR,不知道可不可以就用我现在设计的这个引物去做?因为目的基因是多基因家族,所以在设计引物时我是在3非翻译区设计的引物,不知道荧光定量PCR中,此引物还可不可以用?
答
完全可以,PCR长度从50bp到数百都可以,不止局限于150-300个碱基对.楼上说的有道理,但是有一点要注意,最好计算一下扩增片段的Tm值,这样做溶解曲线的时候,光有一个峰还不够,而且得到的TM和你计算的Tm相吻合才行.
是否在翻译区没有影响.