反转录PCR引物如何设计?已经得到cDNA第一链,引物设计是以cdna为模版,设计上下游引物吗?cDNA不是只有一条链吗,是不是只需要一条引物?求详解.

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• 我提取RNA,反转录得到cDNA,我要由此扩增功能基因,请问引物设计时,用查到的mRNA序列,还是用cDNA序列我要克隆一个基因,从NCBI查到该基因近似物种的mRNA(没有查到cDNA).我的路线是先提取RNA,反转录成为cDNA,由cDNA进行PCR,得到该基因.但是,在引物设计时,我不清楚是应该用近似物种的mRNA序列进行设计,还是用cDNA序列进行设计.如果用cDNA序列进行设计的话,我是否只需用在线工具转换一下即可?