请教细胞数目技术测定的原理和步骤

博凌科为原理取经一定稀释的细胞或小孢子原生质体悬液,把它注入血球记数板的记数室中,然后在显微镜下逐格计数.因为记数板是一块特制的载波片.其上由四条平行槽 构成的三个平行台,中间的平台较宽,此平台的中间又被一短槽隔成两半,每边平台上面各刻有一个方格网,每个方格网共分九大格,*大格即为此计数板的计数 室.计数室的边长为1mm.中间平台下陷0.1mm,盖上盖片后计数室的容积为 0.1mm.所以,可根据在显微镜下观察到的细胞数目,换算成单位体积中细胞的数量.常用血球记数板的计数室有两种规格：一种是一个大方格分成16个中方 格,而每个中方格又分成25 个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格.不管是那种规格,其计数室的小格数总是相同的,既由400个小方格组 成.计数时,通常只计5个中格的细胞数即可.操作步骤 样品 取悬浮细胞小孢子或原生质体悬液,稀释到一定比例.检 查记数板 在正式计数前,先用显微镜检查记数板的计数室,看其是否沾有杂质或干枯的菌体.若有污物,则需作以下几步清洗：（1） 擦洗.用药棉蘸取95%酒精,轻轻擦洗计数板的计数室.（2） 冲洗.用蒸馏水冲洗计数板,并用毛边纸吸干其上的水分（注意：勿哟内火焰来烤干）最后用擦镜纸揩干净.（3） 镜检.镜检清洗后的计数板,直至计数室无污物时,才可用于细胞的计数.加样 先将盖波片安方在计数室上面,然后摇匀样品取悬液,使它沿着盖波片和计数板间的缝隙渗入计数室,连续2~3次,直至充满计数室平台为止.计数 将加好样品的记数板置于显微镜载物台的*,然后按下列步骤操作：（1） 找计数室.先在低倍显微镜下寻找计数板上的大方格网位置.寻找时显微镜的光圈要适当缩小,使视野偏暗.然后顺着大方格线,移动计数板,使计数室位于视野中 间.（2） 转高倍镜.转至高倍镜后,适当调节光度,使细胞和计数室线条均清晰为止.然后将计数室一角的中格移至视野中.（3）计数.通常以计5个中格的细胞值来代表计数室中的细胞量.将凡要计数的中格中的细胞逐一计数.计数时为了避免重复或遗漏,常将分布在格线上的菌体,一律以接触方格底线和有侧线上的菌作为计入本格内的菌数.以减少人为计数误差.将计的细胞数填入表格中.（4） 清洗 计数完毕后,记数板先用95%酒精轻轻擦洗,再用蒸馏水淋洗,然后吸干,最后用擦镜纸揩干净.