RNA是如何反转录成cDNA的?过程和原理怎样?我做反转录的操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水,65C反应10min,冰上放置5min后,再加dNTP,RNaseA,BUFFER,MTV逆转录酶,反应25℃10min,37℃60min,70℃10min.我想请教每一步的原理,为什么这么做?
问题描述：
RNA是如何反转录成cDNA的?过程和原理怎样?
我做反转录的操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水,65C反应10min,冰上放置5min后,再加dNTP,RNaseA,BUFFER,MTV逆转录酶,反应25℃10min,37℃60min,70℃10min.我想请教每一步的原理,为什么这么做?
答
操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水
65C反应10min,冰上放置5min后：这一步是让RNA变性,把RNA的二级结构打开；
再加dNTP,RNaseA,BUFFER,MTV逆转录酶,
反应25℃10min：这一步是让反转录引物（oligodT,随机引物）和模板RNA退火结合
37℃60min：这一步是反转录酶的工作温度
70℃10min：这一步是变性,把合成的cDNA和RNA变性开,就拿到单链的cDNA