克隆一个未知的基因拿到序列需要多久?
问题描述：
克隆一个未知的基因拿到序列需要多久?
我想克隆一个未知的基因,简并引物反转录再RACE全长.不做表达的话要多久?保守估计.基因不是特别偏,是受体亚基.鱼脑.
答
在设备齐全的情况下,从最初分析开始呢,需要的时间大体是：
1 分析序列,设计简并引物,送公司合成引物需要等4-5天.等的过程中提取RNA和反转录时间足够了.
2 引物合成送到后,使用制备好的脑 cDNA模板利用简并引物进行PCR,然后电泳检测,这个阶段紧凑的话1-2天.
3 如果成功克隆出了目的条带,那么就要回收,做TA克隆,然后测序.简并引物克隆出的条带貌似不太适合直接回收测序的.片段回收、与T载体连接过夜、连接后转化至感受态细菌、涂板过夜培养、单克隆小量培养、鉴定单克隆、阳性克隆送样测序、测序结果回来.这个过程需要8-10天.
4 如果测序成功了,那么继续做RACE.重复1、 2、 3步 .
一切顺利的话,30-40天的功夫吧...