PCR扩增gc含量很高的序列我要克隆一个gc含量很高（75％）的基因,然后在真核细胞表达,因为想要整个orf,但是终止子附近的gc 含量很高（大于80％）,但还要把终止子突变掉,所以引物还必须在终止子上.请问对于设计引物和pcr扩增有什么好的建议.

分类: 作业答案 • 2022-08-13 18:58:00

问题描述：

PCR扩增gc含量很高的序列
我要克隆一个gc含量很高（75％）的基因,然后在真核细胞表达,因为想要整个orf,但是终止子附近的gc 含量很高（大于80％）,但还要把终止子突变掉,所以引物还必须在终止子上.
请问对于设计引物和pcr扩增有什么好的建议.

答

用TaKaRa的GC buffer进行扩增就行了。还有其他很多生物公司都有各自的GC buffer的，可以改善高GC下的PCR效率（一般GC在85%以上都可以有效扩增）。

答

没事,照常扩吧
gc buffer ,然后可以引物退火温度高一些,60以上.采用2步法试试