某一蛋白经SDS-PAGE后在标准蛋白的13000~36000D间出现了一条带,加入巯基乙醇和碘乙酸处理后,发现SDS-PAGE后仍然为一条带,且带的位置在13100D处,试推断一下该蛋白的可能结构.(碘乙酸可以结合在巯基上)
问题描述:
某一蛋白经SDS-PAGE后在标准蛋白的13000~36000D间出现了一条带,加入巯基乙醇和碘乙酸处理后,发现SDS-PAGE后仍然为一条带,且带的位置在13100D处,试推断一下该蛋白的可能结构.(碘乙酸可以结合在巯基上)
答
这个蛋白是由一条单独肽链所构成的,分子量大小为13100D,其中内部含有至少一对半胱氨酸。原因是未经过强还原剂处理的蛋白二硫键不能打开,在SDS-PAGE中存在空间结构使迁移率降低,这样分子量就比13000D要大。经过强还原剂(巯基乙醇等)处理后,二硫键打开后还只有一条带,证明这个蛋白是一条单独的肽链,如果是多条肽链的话二硫键打开后就应该是两条以上的带。打开二硫键的肽链在SDS-PAGE中不会受到空间结构的影响,所以能够正确的反应分子量,所以该蛋白的分子量应为13000D。在蛋白质中,二硫键的形成只会在两个半胱氨酸之间,所以这个蛋白至少含有一对半胱氨酸。
答
巯基乙醇作用:一是防止蛋白质或酶等分子中的SH-基氧化成S-S,二是某些酶反应中维持体系的还原环境.及有可能该蛋白质含有S-S,在巯基乙醇作用下还原为SH-.断开二硫.碘乙酸:是蛋白水解酶抑制剂在蛋白质提取过程中防止...