琼脂糖凝胶电泳,做胶加EB目的

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• mRNA反转录中使用olig（t）18做引物所得到的是单链cDNA吗?如果是的话如何才能得到双链的cDNA啊?再麻烦各位大虾们，反转录所得的cDNA为什么不能用琼脂糖凝胶加EB溶液进行直接检测呢？既然RNA和DNA都可以做到的？
• PCR,将引物原液做琼脂糖凝胶电泳,一般点样用多大量还有我的引物有22对碱基，要跑胶的话，琼脂糖凝胶应作成百分之几的？我看资料上讲检验正反引物的浓度，用引物原液做琼脂糖凝胶电泳。
• 质粒酶切后,目的片段DNA是小片段,琼脂糖电泳图目的条带太暗,怎么增加亮度?我的目的条带在200bp左右,酶切跑胶,能看见目的条带,但是太暗了,怎么能够增加亮度啊?补充：我用的琼脂糖凝胶浓度是1.5%,酶切体系是20uL,上样量也是20ul,工作液中的EB浓度是0.6%.怎么改进实验啊?是目的条带太暗（小片段），切开的大片段挺亮的，而且加了质粒对照了，质粒也比较亮（加了3ul）
• 为什么我DNA跑琼脂糖凝胶电泳时跑不出孔我们用PCR扩增出来的DNA分子,在跑琼脂糖凝胶电泳回收时居然跑不出孔 但是有条带,不知道是什么原因,另外说明一下,不是琼脂糖凝胶电泳的问题,因为我点了几次,而且其他的都能跑出很好的条带（不是一批上的PCR反应）,而就这一批上的没跑不出电泳,请专业人士分析一下我是不是加错了什么东西让DNA分子不带电.（我加的东西：buffer,dNTP,引物,酶,ddH2O,TE）加的东西也没问题天天用引物也没问题.我扩的pcr一般在几百bp 不可能跑不出去或者太大 我用的3000marker作对照,而且另一批跑出去了.就算我没有扩对目的基因,也会有不对的带啊 但它在胶空那儿有很亮的带
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• 琼脂糖凝胶电泳时,琼脂糖的浓度为2%,胶不凝是怎么回事啊?还要继续增大琼脂糖的浓度吗?我见书上说2%的浓度做出来的胶很好很合适的了,可我按这个浓度做的胶却不能拿,一动就烂.
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• 质粒DNA琼脂糖凝胶电泳中质粒超螺旋、开环、直链跑胶快慢次序是什么?听学长说其实不是线性的跑得最慢.而是开环的跑得最慢,他们自己做实验得到的结果,我想问问各位真正（注意不要道听途说和各种搬运工!）做过实验的得到的结论是什么?
• 琼脂糖凝胶电泳请问电泳缓冲液为什么要没过凝胶面约1mm?另外,可以先加样再让电泳缓冲液没过胶面吗?
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