在SDS-PAGE电泳前,蛋白质样品应该如何处理

问题描述:

在SDS-PAGE电泳前,蛋白质样品应该如何处理

一般在用缓冲液或者超声粉碎细胞后,得到的溶液都要高速离心(10000 g)10分钟,以去除不可溶的物质,这样在跑SDS-PAGE的时候不会出现拖带。

超声破碎---离心取上清---加loading buffer---沸水浴3-5min---短暂离心 ---上样

这个是看你的目的了,如果你要跑还原性电泳,那么样品需要用含有β-巯基乙醇的loading buffer沸煮5分钟,这样使蛋白间的二硫键在还原剂β-巯基乙醇的作用下被打开,得到的是蛋白的一级结构.而非还原的电泳就是在loading buffer中不加入还原剂β-巯基乙醇,这样的电泳比较能够真实的反应蛋白当时的情况,比如二聚体或者多聚体之类的.