【求助】我在PCR,加样用量正好的,加样到最后为什么不够了?
问题描述：
【求助】我在PCR,加样用量正好的,加样到最后为什么不够了?
25微升体系,引物与模版各加入2微升（足量）,其他组分21微升混合起来后加入.但是其他组分混合后 加到倒数第4个时候,就不够用了,我算了是正好的啊,为什么呢?
答
一般由于液体附着在枪头上和管壁上,会有一定损失,所以加的时候可以做N+1（N为本来要配的个数）个
但是你差4个,也就是100微了,这个差得太大了,建议你再计算一遍用量,然后列表,按着表加,以及检查枪和枪头,确保枪头没有松动,枪也加得准确恩 你说的太对了，我正在检查哪一步少加东西，刚才我跑了电泳，果然没有条带呵呵，一般加的成分多我都是列表，特别容易加错，现在用的Taq mix，加得简单些