做RT-PCR设计引物时,找引物序列有哪些好方法?

我也做得RT-PCR,是提取某物种中未测序的一段基因.是用近缘物种基因进行比对,得到保守序列设计引物,再提取总RNA,RT-PCR得到目的基因的片段我需要检测的分子，在nucleotide里找不到它的序列，不知道要怎么办，有没有好的建议给呢？用几种近缘物种的比对呀，找保守区设计简并引物，RT-PCR获得部分片段后测序，根据测得的序列设计特异引物，再用RACE法分别向两端延伸，得到的两段序列拼接就可以得到全序列了 我做的物种的那段基因数据库也没有，就是找近缘物种来设计引物的，目前已经得到结果了。