农杆菌介导水稻转基因体系建立的关键技术是什么?

农杆菌介导法是最常用的双子叶植物的转化方法,水稻虽然是单子叶植物,亦可以采用此方法.
整个转基因体系的建立步骤大致可以归纳为：目的载体的构建---载体的农杆菌转化---农杆菌与植株共培养---转化植株的筛选---转化植株的鉴定.
在每一步中都涉及到很多的方法与技术.目的载体的构建,包括目的基因的克隆,载体的酶切,连接,以及测序分析.载体的农杆菌转化,目前有很成熟的方法,试验中应注意热激和冷激的时间.农杆菌与植株的共培养,即为植株转化实验,在溶液中加入促进植株愈伤生长的激素能一定程度提高转化率.转化植株的筛选,大多是利用抗生素进行筛选的,抗生素的选择则需根据目的载体确定,设置不同梯度的抗生素对植株进行筛选.转化植株的鉴定,一般采用PCR法.以上所有的操作,都应该在无菌环境下进行,无菌是组培的一项基本,但是重要的要素.