关于Sanger法测DNA序列的一个小问题~为什么要用放射性同位素标记任意一种dNTP,而不是引物或ddNTP?我觉得如果在某条链终止前没有该种被标记的dNTP,那么在最后放射自显影是不就无法显示这条核苷酸吗?比方说GGACTTC这条链,如果终止在GGAddC处,而标记的核苷酸是dTTP,那么最后它能显示出来吗?
问题描述：
关于Sanger法测DNA序列的一个小问题~
为什么要用放射性同位素标记任意一种dNTP,而不是引物或ddNTP?我觉得如果在某条链终止前没有该种被标记的dNTP,那么在最后放射自显影是不就无法显示这条核苷酸吗?比方说GGACTTC这条链,如果终止在GGAddC处,而标记的核苷酸是dTTP,那么最后它能显示出来吗?
答
测序的时候,加入的ddNTP是少量的,而dNTP都是过量的.4种普通dNTP中加入少量的一种ddNTP后,发生的其实是正常的链的延伸与偶然发生的ddNTP掺入导致的链的终止之间的竞争.分析你举的GGACTTC的例子,在加入ddC的试管,会出...