提取DNA时,防止DNA断裂的方法有哪些?
问题描述：
提取DNA时,防止DNA断裂的方法有哪些?
答
提基因组DNA：基因组断裂是肯定的,主要是要抑制Dnase的活性.提取过程中的机械力可能使大分子DNA断裂成小片段,所以为保证DNA的完整性,各步操作均应较温和,避免剧烈震荡.
浓盐法提取时,为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.
苯酚抽提法提取时,苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.
试剂盒抽提的话,按照说明书上做就行了,一般不会有问题.
提质粒DNA：为了防止质粒断裂和基因组断裂混入最后提取的质粒中,在裂解这一步一定要轻,不能剧烈震荡.
大质粒(大于15kb) 容易受损,故应采用温和裂解法从细胞中释放出来.将细菌悬于蔗糖等渗溶液中,然后用溶菌酶和EDTA进生处理,破坏细胞壁和细胞外膜,再加入SDS一类去污剂溶解球形体.这种方法最大限度地减小了从具有正压的细菌内部把质粒释放出来所需要的作用力.