1 要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作?关键在哪几步?为什么?2现有一株未知的细菌 ,请鉴定其革兰氏染色阳性还是阴性?如何保证你的染色结果的准确性?

关键步骤在1，固定。固定温度过高很容易导致菌体变形；2，脱色。脱色过度很容易导致假阴性。
为保证染色结果的准确性，需要1，选择对数末期的菌染色，过早细胞结构不典型，过晚细胞壁结构可能开始松散。2，选择一确定是阳性或阴性的菌株在待测菌涂斑附近涂斑，两种菌一起做染色的所有步骤。

干燥、固定。固定时通过火焰1—2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2．染色
（1）初染 加草酸铵结晶紫一滴，约1min，水洗。
（2）媒染 滴加碘液冲去残水，并染色约1min，水洗。
（3）脱色 将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒钟，立即用水冲净酒精。
（4）复染 用番红液染1—2分钟，水洗。
（5）镜检 干燥后，置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。
（6）同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。
注意：染色时间要严格控制。关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。

操作步骤1．涂片将培养14—16小时的枯草芽孢杆菌和培养24小时的大肠杆菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚）,干燥、固定.固定时通过火焰1—2次即可,不可过热,以载玻片不烫手为宜.2．染色（1）初染 加草酸铵结晶紫...