想用PCR扩增下面一段序列,急求高手写出上游引物和下游引物.要求上游加EcoRⅠ酶切位点、下游加BamH I酶1 acgcgcaaga ttaggtgggg cgccagagcc ggggcacctg cgcaggcttg gctgcgccct61 ctcgcgccgc acgctctgcg ggttcctccc ttcttccgag cctctcctct ggccgccgcg121 cgggagagag gccgagatgg cagatgagat tgccaaggct caggtcgctc ggcctggtgg181 cgacacgatc tttgggaaga tcatccgcaa ggaaatacca gccaaaatca tttttgagga241 tgaccggtgc cttgctttcc atgacatttc ccctcaagca ccaacacatt ttctggtgat301 acccaagaaa catatatccc agatttctgt ggcagaagat gatgatgaaa
想用PCR扩增下面一段序列,急求高手写出上游引物和下游引物.要求上游加EcoRⅠ酶切位点、下游加BamH I酶
1 acgcgcaaga ttaggtgggg cgccagagcc ggggcacctg cgcaggcttg gctgcgccct
61 ctcgcgccgc acgctctgcg ggttcctccc ttcttccgag cctctcctct ggccgccgcg
121 cgggagagag gccgagatgg cagatgagat tgccaaggct caggtcgctc ggcctggtgg
181 cgacacgatc tttgggaaga tcatccgcaa ggaaatacca gccaaaatca tttttgagga
241 tgaccggtgc cttgctttcc atgacatttc ccctcaagca ccaacacatt ttctggtgat
301 acccaagaaa catatatccc agatttctgt ggcagaagat gatgatgaaa gtcttcttgg
361 acacttaatg attgttggca agaaatgtgc tgctgatctg ggcctgaata agggttatcg
421 aatggtggtg aatgaaggtt cagatggtgg acagtctgtc tatcacgttc atctccatgt
481 tcttggaggt cggcaaatgc attggcctcc tggttaagca cgttttgggg ataattttct
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601 tgcctgtgta tggagagatt caagaaataa ttttaaaacc gcatacataa taaaagacat
661 tgttgcatgg cttatagtct ctctgagtgt tgcgtttgat ttgttatttt aaaaacatat
721 ttgttggaat atgtgaaggt gggtttataa ttttggatgt ttcttgcttt ttcttcccaa
781 gg
//
F:atgcgaattcacgcgcaagattaggtgggg
R:atgcggatccccttgggaagaaaaagcaag
扩增时前5个循环退火温度可略，以后退火和延伸均用72度即可
你如果要扩增全部这段序列，那么只能在序列最前面和最末尾取一段碱基序列扩增，一般取24个碱基就可以了。
这段序列分析后发现没有上述两个酶切位点，所以你自己加就可以了。
5':CG GAATTC ACGCGCAAGATTAGGTGGGG
3':CG GGATCC CCTTGGGAAGAAAAAGCAAG
引物组成为：保护碱基+酶切位点+目的基因末端序列.
由于你要扩增全部这段序列,所以只能完全取前和后末端的序列.但是这段基因的末端序列貌似并不适合做引物,你先做做试试吧,不行的话你可能需要扩增更长的包含这段基因的序列,然后再进行亚克隆；或者分段克隆...