RNA反转录为cDNA 原理 主要想知道各个水浴、冰浴步骤在实验中的作用RNA反转录过程步骤如下：将提取的RNA用DEPC水吹起,加入引物1、引物2,加入dNTP,放入70度水浴5min,冰浴1min,然后加入DTT\BUFFER酶,37度水浴2h,70度水浴10min,冰浴2min.请问70度水浴,37度水浴,冰浴在实验中起什么作用?
问题描述：
RNA反转录为cDNA 原理 主要想知道各个水浴、冰浴步骤在实验中的作用
RNA反转录过程步骤如下：
将提取的RNA用DEPC水吹起,加入引物1、引物2,加入dNTP,放入70度水浴5min,冰浴1min,然后加入DTT\BUFFER酶,37度水浴2h,70度水浴10min,冰浴2min.
请问70度水浴,37度水浴,冰浴在实验中起什么作用?
答
第一次70度水浴5min为让RNA二级结构打开,便于引物结合.
第一次冰浴1min为了退火,让引物能够结合RNA.
37度水域是让cDNA聚合.
第二次70℃水浴是再变性,让引物脱离模板RNA和cDNA第一链.
第二次冰浴是为了让cDNA-RNA复性成为cDNA-RNA杂合双链.
明白没有?