利用逆转录酶和mRNA模版合成cDNA的主要步骤是什么
问题描述:
利用逆转录酶和mRNA模版合成cDNA的主要步骤是什么
答
RT-PCR(25μL)
RNA: 5μL
dNTP: 10mM 1.25μL;2.5mM 5μL
oligod(T):1μL
↓65℃,5min
-20℃,2min
↓
M-MLV buffer: 5μL
RNasin: 1μL
M-MLV: 1μL →37℃,2min→37℃,1h
RNase-free ddH2O 补到25μL→70℃,15min -20℃保存
答
1、以mRNA为模板,以四种脱氧核苷酸作原料,在逆转录酶作用下,合成DNA单链
2、以DNA单链为模板,以四种脱氧核苷酸作原料,继续合成DNA另一条链,两条DNA链形成cDNA