利用逆转录酶和mRNA模版合成cDNA的主要步骤是什么

问题描述:

利用逆转录酶和mRNA模版合成cDNA的主要步骤是什么

  RT-PCR(25μL)
  RNA: 5μL
  dNTP: 10mM 1.25μL;2.5mM 5μL
  oligod(T):1μL
↓65℃,5min
   -20℃,2min

  M-MLV buffer: 5μL
  RNasin: 1μL
  M-MLV: 1μL →37℃,2min→37℃,1h
  RNase-free ddH2O 补到25μL→70℃,15min -20℃保存

1、以mRNA为模板,以四种脱氧核苷酸作原料,在逆转录酶作用下,合成DNA单链
2、以DNA单链为模板,以四种脱氧核苷酸作原料,继续合成DNA另一条链,两条DNA链形成cDNA