在提取RNA后测了RNA浓度,但各个标本浓度不一样,比如有A 2ug/ul,有B 3ug/ul,请问逆转录时总RNA的量是不是说必须要一样,比如A加1.5ul,B加1ul,即均为3ug.还是都加一样的体积比如1ul,哪种加法是对的?逆转录时总RNA的量对cDNA、PCR结果有没有影响?
问题描述：
在提取RNA后测了RNA浓度,但各个标本浓度不一样,比如有A 2ug/ul,有B 3ug/ul,请问逆转录时总RNA的量是不是说必须要一样,比如A加1.5ul,B加1ul,即均为3ug.还是都加一样的体积比如1ul,哪种加法是对的?逆转录时总RNA的量对cDNA、PCR结果有没有影响?
答
博凌科为-为你逆转录时总RNA的量对cDNA、PCR结果看你是准备用cDNA来做什么用。一般来说，如果后面做绝对定量，有影响，如果只是PCR，除了同样循环次数条带亮度不同，可能没有其他影响。
答
如果提取RNA是为了测定基因的相对表达量,那么逆转录时各样本间总RNA的量要保持一致,就像你说的A加1.5,B加1,使得总量为3ug.这样才能保证在之后RT-PCR比较基因表达量时,各个样本都站在同一起跑线上.