对于载体的单酶切和双酶切,胶图分别会如何?为什么会这样啊?

问题描述:

对于载体的单酶切和双酶切,胶图分别会如何?为什么会这样啊?

单酶切一个电泳道上会有几个比较亮的带,而且你所根据基因大小所选择的条带内也不一定是你要的.原因是单酶切形成的粘性末端完全相同,就像拼图,除了内容不同,两边完全切合.所以结合方式过多,可能性也多,如质粒和目的基...谢谢您的回答,但我还有些疑问~单酶切不是只在一个地方切开吗?质粒环变成线性吗?没有加酶,怎么会连接呢?还有双酶切中,我只切载体,为什么会有重组质粒~~最近出差,回来晚了哈。那我对你的问题看的多了。你如果酶切就电泳的话就简单了。首先你去查下你是什么质粒,你用的质粒上都有什么酶切位点,重点是一种酶的酶切位点有几个。这个会改变酶切片段的数量。下面我假设你用EcoR I 和Hind III两种限制酶酶切,质粒上只有一个酶切位点1、单酶切应该是一条带。原理,一个酶切位点只是把环状DNA的质粒切成了链状,这条DNA的分子大小无变化,而且所有的都是一样大小。2、双酶切应该是3条带。原理,双酶切最终形成的是2个片段,一般这两个片段一大一小、小的是没用的,大的是用来连接下一步目的基因的。他俩在电泳上的顺序是小的在上,大的在下。最后一个条带是没有被切开的,或这是只有一种酶处理了的质粒。 这3条带的亮度根据酶的量以及处理时间会发生变动(简单理解就是酶切是否充分)。如果酶的量适宜,且时间足够,那么应该是上面的亮,下面的暗。反之则下面量,上面暗。