pcr 条件我做了IGF-1基因5'调制区的,按照别人发的文章条件跑的PCR,自己又优化了条件,结果PCR产物经检测,有目的条带,但好像在100bp下面有一条条带,我怀疑是引物二聚体.请问各位有什么办法能将这条带去掉呀?退火温度我做了梯度试验,55-61度.目的条带很清楚,最下面有引物二聚体条带,这样的PCR的产物能做酶切吗?
问题描述：
pcr 条件
我做了IGF-1基因5'调制区的,按照别人发的文章条件跑的PCR,自己又优化了条件,结果PCR产物经检测,有目的条带,但好像在100bp下面有一条条带,我怀疑是引物二聚体.请问各位有什么办法能将这条带去掉呀?退火温度我做了梯度试验,55-61度.
目的条带很清楚,最下面有引物二聚体条带,这样的PCR的产物能做酶切吗?
答
引物二聚体不会影响酶切，因为你做酶切之前，PCR产物要经过电泳，切胶，纯化，这些步骤早就已经去除了包括引物二聚体在内的杂质。
如果你想要电泳图漂亮，非得没有引物二聚体，那也可以，减少引物在PCR反应体系中的量，减半差不多了。如果你做61度的时候还能做出目的条带，那可以考虑63度退火，这样也可以减少引物二聚体
答
太专业了！！！！！！！！！！！！！！！！
答
引物二聚体出现没关系的,直接回收目的条带即可.对实验没有什么影响.