琼脂糖凝胶电泳的DNA为什么要酶切我查文献,看到有些文献上提取质粒DNA,进行双酶切后才进行琼脂糖凝胶电泳,我的实验是提取小鼠的成纤维细胞的DNA后,对抑制因子Smad7进行重亚硫酸盐修饰的PCR,然后琼脂糖凝胶电泳,是不是我的DNA不需要酶切就可以跑胶?我不太明白为什么质粒DNA要酶切后电泳

问题描述:

琼脂糖凝胶电泳的DNA为什么要酶切
我查文献,看到有些文献上提取质粒DNA,进行双酶切后才进行琼脂糖凝胶电泳,我的实验是提取小鼠的成纤维细胞的DNA后,对抑制因子Smad7进行重亚硫酸盐修饰的PCR,然后琼脂糖凝胶电泳,是不是我的DNA不需要酶切就可以跑胶?我不太明白为什么质粒DNA要酶切后电泳

你好:
我所知道的酶切的目的大致分为两大类:载体的检测和southern预备实验。
你做的如果是常规的PCR检测,一般不需要酶切后再电泳,只是检测一下你的目的基因是否成功进入你的受体材料,酶切后反而看不出来了。
酶切的依据是你自己的载体图中酶切位点的位置与类别,根据不同的酶切位点选择不同种类的酶。酶切位点一般设置在你插入的目的基因的两侧,如此一来,经过简单的酶切,就可以将你所需要的目的条带完整的切下来,再经过琼脂糖凝胶电泳将两者分离。在此说一下凝胶电泳的原理,在琼脂糖凝胶的胶微粒之间,存在着能够容许DNA通过的间隙,通过的速率取决于你的DNA的分子量,分子量越大迁移率越慢,反之亦然。
举个例子,你的载体或基因组是10bp,你的目的条带是3bp,对你的材料进行酶切后,一般会出现三条清晰的条带,高度由上至下依次为(越高分子量越大):
1.酶切不完全残留的完整基因组条带10bp
2.酶切后剩余部分的载体,大约7bp(10bp-3bp)
3.你的目的基因,3bp(10bp-7bp)
不知您明白了没有,如果是PCR的话,一般不需要酶切!(还是同其他人说的一样,要先明确你电泳的目的是什么,然后再看到底需不需要酶切。)

你要具体说说为什么电泳啊……我觉得很可能是看外源片段是不是连进去了啊……

呃,简单地说,质粒DNA酶切是因为我们之前在质粒上插入了一些目的片段,将质粒转到细菌里,细菌繁殖,再抽繁殖后的细菌里的质粒,就可以得到大量的含有目的片段的质粒,但我们要的是目的片段,质粒上的其他东西要去掉才行,所...