碱裂解法提取质粒后质粒被降解可能原因有哪些?取菌的时候是在酒精灯旁进行的无菌操作,两次离心都是12000转12分钟,最后在跑琼脂糖凝胶电泳时有EB显色时有拖尾现象,是不是被降解了,可能的原因有哪些?整个提取过程中还有没什么需要注意的地方?
问题描述：
碱裂解法提取质粒后质粒被降解可能原因有哪些?
取菌的时候是在酒精灯旁进行的无菌操作,两次离心都是12000转12分钟,最后在跑琼脂糖凝胶电泳时有EB显色时有拖尾现象,是不是被降解了,可能的原因有哪些?整个提取过程中还有没什么需要注意的地方?
答
RNA污染吧，用没有RNase水？
答
还有可能是你的琼脂糖凝胶浓度太高了,浓度越高,分子筛效应越大,质粒又比较大,当然容易拖尾了.其次也可能是你的电泳电压过大；还有就是RNA污染,你提完质粒后没有用RNase降解,不过这就不叫拖尾了,称作有杂带.
至于注意事项,你搞清每一步的原理后自己仔细想想就知道了.时刻记住不要让质粒因为机械损伤而打断,不要让质粒被降解,尽量除去质粒内残存的乙醇,因为这会对接下来的酶切造成很大的影响.