本人看了很多论坛和资料,大多的elisa都是测未知抗原和抗体,因为我是从植物内混合蛋白质中测出目的蛋白的浓度,我们目前有需检测蛋白的相关抗原、自己免疫的多克隆的一抗和HRP-标记的二抗,是不是我们包被的时候用包被液倍比稀释抗原,并将需检测的

本人看了很多论坛和资料,大多的elisa都是测未知抗原和抗体,因为我是从植物内混合蛋白质中测出目的蛋白的浓度,我们目前有需检测蛋白的相关抗原、自己免疫的多克隆的一抗和HRP-标记的二抗,是不是我们包被的时候用包被液倍比稀释抗原,并将需检测的蛋白也按照设定的1:20、1:40、1:80、1:160稀释后一起包被过夜?
我在想我是不是可以认定我们有的这个抗原则为我们的标准品,然后来检测我们的蛋白.不甚感激~
我们目前的设计流程是：
1.包被抗原和待测蛋白 4℃过夜
（抗原按照倍比稀释加入包被液为:10,5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.15625,0 单位是μg/ml 蛋白1:100稀释都加入)
2.第二天弃液,PBST洗板3次,拍干
3.每孔加入3％BSA封闭至满孔,37℃湿盒湿育 2h
4.洗版,
5.每孔加入稀释好的一抗（1:80）100μl,37℃湿盒湿育 2h
6.洗版,
7.每孔加入辣根酶标记的IgG(1:1000)100ul,37℃湿盒湿育 1h
8.
9.每孔加入100ul底物反应液（现用现配）暗反应15min
10.加入50μl 2MH2SO4 停止反应上机在450nm下测标曲并读值.
目前的问题是：如何能确定我们蛋白的最佳稀释浓度,和一二抗的最佳工作浓度?