PCR引物GC含量过低时候,如何调整PCR体系?

问题描述:

PCR引物GC含量过低时候,如何调整PCR体系?

!gyesang(站内联系TA)你PCR的模板是什么?你做PCR的目的是什么?设计引物的时候,上下游引物的GC含量相差尽量 不要太大,你接下来可以试下touchdown.意孤城_(站内联系TA)如果不想麻烦就touchdown PCR,如果求稳当设置梯度PCR,温度上下限时你两条引物的温度cicelyzh(站内联系TA)一般GC含量低的话把引物序列设计稍微长一点,就可以补偿Tm低的问题.你说的百分比差别也不是那么大.如果两个引物的tm不同,按照低的考虑PCR的退火温度.加酶切位点的引物的Tm需要按照不包含酶切位点的序列计算.xikexiao(站内联系TA)GC含量最好在50%以上比较好,不然退火温度达不到,建议重新设计引物scilencing(站内联系TA)试试梯度PCR的策略