已知pI值为6.2,如何从肝中分离提取纯化鉴定某种酶最好有实验步骤
问题描述：
已知pI值为6.2,如何从肝中分离提取纯化鉴定某种酶
最好有实验步骤
答
1）．脱脂肝粉制备:将新鲜动物肝脏切成碎块、搅碎、充分匀浆,然后加入丙酮后离心,收集沉淀,干燥.然后将肝粉颗粒研磨、过筛、收集细粉,加入三氯甲烷充分搅拌,抽滤,重复两次,收集滤饼、干燥.
2）．酶粗品制备:将肝粉用氨水溶液恒温抽提两次,合并滤液.将所得水溶液用乙酸溶液酸化、离心,收集上清液.然后调PH至中性,用硫酸铵初次盐析、离心、收集上清,再次盐析、收集沉淀,得酯酶粗品.
3）．精制：将粗品用磷酸盐缓冲液溶解后,经过阴、阳离子交换层析柱纯化,接收主峰,浓缩,然后再经过凝胶层析柱分离,接收主产物峰.
4）超滤、浓缩、冻干.将收集的溶液用微孔滤膜预过滤后,超滤、浓缩、冻干.