老师,我想做标准曲线验证一下扩增效率,知道rna的浓度,怎么换算成拷贝数,有人说起码要知道bp数,
问题描述：
老师,我想做标准曲线验证一下扩增效率,知道rna的浓度,怎么换算成拷贝数,有人说起码要知道bp数,
我又不是做的质粒,就是提取标本的rna,然后想倍比稀释做一下曲线,这个bp又是谁的bp呢,ABI7300的标准品要输入拷贝数,我输入RNA的浓度可以吗
答
你这个情况不需要知道拷贝数目.把样品等比例稀释,比如1:4,或者1:10. 至少做4-5个点.PCR后按照相对浓度和扩增的Ct值做曲线,就可以得到扩增效率了.
如果要知道拷贝数目,必须有已知浓度的含有该序列的质粒来作为批准品做标准曲线.可是,老师,7300做曲线有一步需要输入浓度，我能直接输入RNA浓度吗单位是ng/ul,这个数值机器默认吗，平时看着他们都是输的拷贝数，如果扩增后根据ct值自己是不是也可以手工画曲线，我三种不同样本，但是检测同一个基因，每种标本还需要各自做曲线？可以输入相对浓度，比如1， 0.5， 0.25。。。。也可以根据CT值自己画曲线，用EXCEL同一个基因只要做一次