SDS-PAGE跑了4、5回了,条带颜色总是特别浅看不清楚,连MARKER都看不清楚,是怎么回事啊?

问题描述:

SDS-PAGE跑了4、5回了,条带颜色总是特别浅看不清楚,连MARKER都看不清楚,是怎么回事啊?
连着练了好几天了,每次都不出结果,
用相同的样品在别人制的胶上面跑出来就看的清楚,不知道制胶的时候什么最影响条带深浅啊
这两天又跑了好几次,没有一次成功,都是条带颜色浅。
重新配制了分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液,APS也是新配的。样品是昨天新制的,跑出来还是颜色浅,MARKER分别用了两种,颜色都很浅。
染色液是考马斯亮蓝,昨天也新配了。
真不知道是什么原因了。
有一点,我用别人的分离胶缓冲液的时候,分离胶跑1小时就到头了,用我自己配的要跑1个半小时,不知道和条带颜色浅有没有关系,条带形状是正常的。

1上样量太少,或者电泳时候loading buffer不行,导致蛋白跑了
2脱色时间不够,建议K-G染色后,脱色液在30min内换两次
3重新按标准配置电泳缓冲液.