竞争ELISA反应中,抗体固定、封闭后,待测抗原和酶标抗原一起加和分开加有什么区别呢?

一起加更准确一些.分开加的话,特别是加样时间长的话,先加的会先反应上去,这样不在同一起跑线上,竞争不公平,结果不准确.但如果加样时间很短（具体多短也不好说）,影响小.分开加时，待测抗原与固定抗体反应，洗涤后，加酶标抗体，如果显色反应颜色深，说明待测抗原少，反应颜色浅，说明待测抗原多，理论上似乎是可以起到竞争作用的。但一起加和分开加的优势分别是什么呢？开始错误的理解你的意思，以为是先加，后加，一个是先混到一起再加。假如抗体为100，抗原（待测）为1－100之间，那么抗体没有完全被占用，这样后加的酶标抗原能有地方吸附，先加后加一个样。假如抗体为100，但抗原为100-200或者更高，而酶标抗原可能是10-1000，这样先加的话，后面的酶标抗原就无法吸附。高低结果都一样。但一起加入的话，还是能正常的竞争。当然，这个是我的理解。你这个分步反应，操作中比较麻烦。一起加的话，一步反应，出结果快。那就是一起加比分开加有优势，会不会出现不能一起加，只能分开加的情况？应该有吧，比如血清中有物质对酶有抑制作用。