高中常用的细胞计数法有哪几种?分别适用于哪种情况?

细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法.一般利用计数板(血球计数板)进行.即可用于分离(散)细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数.不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液. 1、 制备细胞悬液 对于悬液培养的细胞,可直接进行下面的步骤2(计数与计算过程).如果计数对象为贴壁生长的细胞,首先需将培养物制备成细胞悬液. (1) 终止培养,将培养液吸出,用PBS洗培养物一次. (2) 给培养瓶内加入1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,于37℃消化3～5min .期间不断在镜下观察.当细胞变圆接近脱壁时,弃消化液. (3) 加入一定量的培养液(如果这些培养细胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使细胞脱壁而制成细胞悬液. 2、计数与计算过程 ( 1) 在细胞计数板*放置计数专用的盖玻片. (2) 用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹糟处流出悬液,至盖玻片被液体充满为止. (3) 置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数.对于压线的细胞只计数在上线和左线者,对于细胞团按单个细胞计数. (4) 按下式计数细胞悬液的密度：细胞密度＝(4个大格细胞总数/4)×104个/ml 注意事项： (1) 务必使分散成单个细胞,取样计数前,充分混匀细胞悬液. (2) 显微镜下计数时,遇到2个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算.如果细胞团>10%,说明细胞分散不充分; 或细胞数500个/10 mm2 时,说明稀释不当,需重新制备细胞悬液.