用takara的试剂盒提取大米和大豆的基因组,pcr之后跑电泳,但是电泳总是没结果,没条带.
问题描述：
用takara的试剂盒提取大米和大豆的基因组,pcr之后跑电泳,但是电泳总是没结果,没条带.
试剂盒应该没有问题,因为不久前还用,都提出来了.而且因为提不出来,就换了一个新的,结果还是提不出来,操作应该也没有问题,电泳的话,marker跑的很好,pcr的话,用相同的引物相同的机器做其他实验也是有结果的,所以应该也没有问题.请问还有哪些可能的原因啊.
答
PRC跑不出来先考虑是不是模板的问题,是不是DNA没有抽出来,可以把抽出来的东西跑个胶看一看.如果抽出来了,但是PCR没跑出来,就把模板浓度降低一下；如果DNA没跑出来,就要从抽提步骤上找问题.你们用的试剂盒是洗脱柱类...刚刚跑了提出来的基因组，是没有问题的，也就是说是pcr出了问题，貌似模板加了太多了（25微升体系加了3微升模板），为什么模板浓度太高PCR就没有结果呢。。。。模板的浓度是有一个合适范围，具体为什么，上课的东西都还给老师了。个人感觉如果模板太多，95度那一步应该不能完全解链，特别是基因组DNA。