想请教一个PCR基本问题.PCR时,目标基因的核苷酸序列是未知的,那我们设计引物是根据其近缘种的基因设计
问题描述：
想请教一个PCR基本问题.PCR时,目标基因的核苷酸序列是未知的,那我们设计引物是根据其近缘种的基因设计
PCR时,目标基因的核苷酸序列是未知的,那我们设计引物是根据其近缘种的基因设计吗?
我分离得到一个蛋白,想进行表达,首先要获得其全长基因.提取RNA,要进行一步法RT-PCR,这时需要基因特异性引物,是不是在gene bank 里由其近缘种的保守序列进行设计?这样获得的是目的蛋白的全长基因吗?
答
可以根据其其近缘种的保守基因序列设计,但通常都很难得到全长.要得到基因全长,可先得到中间片段序列,然后RACE或者Inverse PCR都可以尝试下.如果近缘种序列同源性很高,还可以参考其他物种序列,设计几对引物,直接扩增基因全长.