平板菌落计数法下分几种类型,每种类型的操作步骤分别是什么,优缺点分别是什么?

1、平板倾注法\x05\x05
1）、以无菌操作,将检样25g（或25ml）剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水的广口瓶内（瓶内置有适量玻璃珠）或灭菌研钵内,经充分振摇或研磨用成1：10的均匀稀释液.
2）、用1.0ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1.0ml,沿管壁徐徐注入含有9.0ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内液面）,振摇试管混合均匀,作成1：100的稀释液.
3）、另取1.0ml灭菌吸管,按上述操作作10倍稀释,如此每递增稀释一次,即换1支1.0ml吸管.
4）、根据食品卫生要求或对标本污染程度的估计,选择2-3个适宜稀释度,分别作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释液的吸管移1.0ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿.
5）、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃营养琼脂（可放于46×1℃水浴保温）注入平皿约15ml,并移动平皿使混合均匀.同时将营养琼脂培养基倾入加有1.0ml灭菌生理盐水的平皿内作空白对照.
6）、待稀释液入平皿后,翻转平板,置36×1℃温箱内培养24±2h（肉、水产品、乳和蛋品为48±2h）取出,计算平板内菌落数,乘以稀释倍数,即得每克（或ml）样品所含菌落总数.
2、平板表面涂布法
将营养琼脂制成平板,经50℃l一2小时或35℃18—20小时干燥后,于其上滴加检样稀释液0．2ml,用L捧涂布于整个平板的表面,放置片刻(约lO分钟),将平板翻转,移至36±1℃温箱内培养24±2小时(水产品用30℃培养48±2小时),取出,按前述方式进行菌落计数,然后乘以5(由O．2m1换算为1m1),再乘以样品稀释的倍数,即得每g或m1 检样所含菌落数.此法较上述倾注法为优,因菌落生长在表面,便于识别和检查其形态,虽检样中带有食品颗粒也不会发生混淆,同时还可使细菌不必遭受融化琼脂的热力,不致因此而使菌细胞受到损伤而不生长,从而可避免由于检验操作中的不良因素而使检样中细菌菌落数降低.但是本法取样量较倾注法为少(仅倾注法的五分之一),代表性将受到一定的影响.
3、平板表面点滴法 与涂布法相似.所不同者,只是用标定好的微量吸管或注射器针头按滴(使每滴相当于0．025mi)将检样稀释液滴加于琼脂平板上固定的区域(预先在平板背面用标记笔划成四个区域),每个区域滴1滴,每个稀释度滴两个区域,作为平行试验.滴加后,将平板放平片刻(约5～10分钟),然后翻转平板,如前移入温箱内培养6～8小时后进行计数,将所得菌落数乘以40(由o.025ml换算为1ml),再乘以样品稀释的倍．数,即得每g或ml检样所含菌落数.李兆普等利用此方法,与倾注法进行对比试验,经过六种食品,1536件检样的考核结果,倾注法低于点滴法及涂抹法.本法具有快速、节省人力物力,适于基层单位和食品厂内部测定细菌总数用.但此法取样量少,代表性可能受到影响.又食品中细菌数少于3000/g（ml）者受到限制.