如何检验环境水中的微生物?

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水质微生物
一、水质微生物及指示菌
在各种水体,特别是污染水体中存在有大量的有机物质,适于各种微生物的生长,因此水体是仅次于土壤的第二种微生物天然培养基.水体中的微生物主要来源于土壤,以及人类的动物的排泄物及污染.水体中微生物的数量和种类受各种环境条件的制约.
一般认为,水中微生物以革兰氏阴性杆菌占有较大优势.与其他水体相比,河水及溪水中革兰氏阳性菌相对较多,这是因为陆地微生物冲洗污染的缘故.
水体中的致病性微生物一般并不是水中原有微生物,大部分是从外界环境污染而来,特别是人和其它温血动物的粪便污染.水中常见的致病性细菌主要包括：志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、小肠结炎耶尔森氏菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌等.
在实际控制中,对水质卫生质量的评价和控制,是无法对各种可能存在的致病微生物一一进行检测,而一般利用对指示菌的检测和控制,来了解水体是否受到过人畜粪便的污染,是否有肠道病原微生物存在的可能,从而评价水的质量,以保证水质的卫生安全.
目前,世界各国一般认为大肠菌群是指示水质受粪便污染较好的指示菌.
我国水质控制也采用大肠菌群作为指示菌,GB5749-85《*国家标准 生活饮用水卫生标准》规定,生活饮用水中大肠菌群每升不得超过3个.
在某些情况下,水体中的细菌总数也可指示水体受粪便等污染物污染的情况.这里的细菌总数其实是指营养琼脂培养后形成的菌落总数.目前世界各国对于控制饮用水的卫生质量,除采用大肠菌群等指标外,一般还采用细菌总数这个指标.我国GB5749-85《*国家标准 生活饮用水卫生标准》中规定生活饮用水细菌总数每毫升不得超过100个.
二、水质微生物检验方法
GB5750-85《*国家标准 生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法.
（一）细菌总数的检测：
国家标准中,细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中,于37℃经24h培养后,所生长的细菌菌落的总数.
对生活饮用水,直接吸取1ml水样于平皿中,加入营养琼脂后混匀,37℃培养24h,进行计数.
对水源水,根据情况对样品进行10倍梯度稀释,选择适宜稀释液1ml,加注平皿,营养琼脂混匀,37℃培养24h,进行计数.
按照规定格式报告每毫升水中细菌总数.
（二）总大肠菌群的检测：
国家标准中,利用总大肠菌群作为粪便污染的指标.总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的,37℃生长时能使乳糖发酵,在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌.水样中总大肠菌群数的含量,表明水被粪便污染的程度,而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能.
国家标准提供了多管发酵法及滤膜法检测总大肠菌群的方法.
多管发酵法检测总大肠菌群,分为三步：初发酵试验,平板分离,复发酵证实试验.初发酵试验,采用乳糖蛋白胨培养液37℃培养24h,观察产酸产气情况.对阳性管培养物,接种于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基,观察菌落特征,并进行革兰氏染色和镜检.对典型和可疑菌落,接种于乳糖蛋白胨培养液,进行复发酵证实试验,并根据标准所附检数表报告结果.
其中,对生活饮用水,初发酵试验接种水样总量300ml,即100ml接种2管,10ml接种10管,采用两个稀释度,12支发酵管.对水源水,初发酵试验接种水样总量55.5ml,即10ml接种5管,1ml接种5管,0.1ml接种10管,共采用三个稀释度,15支发酵管.两种接种方法,所用的检数表是不同的.
滤膜法检测总大肠菌群,就是利用微孔滤膜,过滤一定量水样,将水样中含有的细菌截留在滤膜上,然后将滤膜帖放在选择性培养基上（如品红亚硫酸钠培养基）,经培养和证实试验后,直接计数滤膜上生长的典型大肠菌群菌落,并计算出每升水样中含有的总大肠菌群数.
三、说明：
1．菌落总数测定中,应选择合适的稀释度进行.生活饮用水,国家标准规定每毫升不得超过100个,因此可以直接吸取1毫升到平板进行培养.
2．培养时间.与食品中菌落计数不同,测定水中细菌总数,培养时间采用24h.
3．总大肠菌群的测定方法,由于饮用水和水源水可能的污染程度不同,因此采用不同的接种量,检数表也不相同.
4．当接种量超过1毫升时,一般采用多倍浓度培养液.如配制3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液50mL,加入100mL水样后,总体积为150mL,培养液恢复到正常浓度.
5．滤膜法检测总大肠菌群,一般在检测较大量低浊度水样时采用,大量水样滤过滤膜后,水中所含有的所有细菌均截留在滤膜上.