关于BD流式细胞仪的问题,流式细胞仪双激光八色与三激光八色有何区别
问题描述:
关于BD流式细胞仪的问题,流式细胞仪双激光八色与三激光八色有何区别
实验室要购置流式细胞仪,现在了解到BD FACSCantoII流式细胞仪标配双激光,检测6色荧光(4-2),PMT升级可实现双激光八色(5-3),如果加配激光器可以实现三激光八(4-2-2).请问1、荧光中的(4-2)(5-3)(4-2-2)分别是什么意思;2、PMT怎么升级实现另外2色光的检测;3、既然都能实现八色检测,那双激光八色与三激光八色有何区别,哪个更好,为什么?希望了解流式细胞仪的朋友能解释下,
答
当然是三激光的好.
每一种荧光染料的激发光都是一个范围,在这个范围内敏感度不同.
一般的2激光配置,都是红蓝 ,5 种在蓝色激发光,3种位于红色通道(5-3)和(4-2)没有本质上的区别.
到底采用什么配置,取决于你们实验室要做什么实验.配了用不到的是浪费,没有要要用到的也是浪费.所以建议你们把要经常检测的荧光种类,所要使用的通道都事先统计一下,再做决定.
如果经常要做多种颜色分析,建议购买4激光的机器,比如LSRII.
你还有什么问题尽管问,我是流式细胞仪实验中心的经理,有多年的经验.那请问不同的荧光通道之间有什么区别呢?你不同的抗体标记了不同的荧光染料,那就要用不同的通道。
理论上,8个通道可以同时检测8种颜色。但是实际上,由于不同荧光染料色谱间的相互重叠,加上商业化抗体的选择限制,往往无法做到。一般通道的数目都要超过同时检测的颜色数目。比如我们经常用13通道的机器同时检测8种颜色,这样设置的时候,选抗体的时候都很容易了。
还有一点要考虑的就是激光的功率,功率越大,分别率就越好。