血细胞计数板怎样使用

血球计数板 　　1 血球计数板
．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 　　3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。 　　4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 　　5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数*1个大方格的 　　血球计数板 　　 血球计数板
菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见右图：即本格中计数细胞为3个。6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。 　　7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。
以计数酵母菌为例 　　(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数. 　　(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可. 　　(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在*的计数室上加盖专用的厚玻片. 　　(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内. 　　(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数*的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数. 　　(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞). 　　(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数. 　　3.计算公式 　　(1)16格×25格的血球计数板计算公式: 　　酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×10四次方×稀释倍数 　　(2)25格x16格的血球计数板计算公式: 　　酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×10四次方×稀释倍数 　　4.血球计数板的清洁 　　血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.

上下各一个十字形状的 分成上下左右中五个部分 每部分是4X4小格 把五个部分的细胞数目数出来然后除以5 再乘以10的4次方 总共就是那么多咯

洗净后,将盖玻片盖在计数板上,用移液管吸取样品,轻轻滴在盖玻片与计数板载玻片的边缘上,利用虹吸现象就好.记住要先将盖玻片盖好,再利用虹吸现象,而不是一般玻璃制片时先滴加样品再盖盖玻片.然后静置,就可以在低倍镜下观察了.

就用血细胞计数板，计数十字格周边四个大方格的每一格，每格内又有4行4列，共16格，所以，一共数64格，加起来除以4，再乘以10^4,再乘以稀释倍数。即：
细胞个数（每1mL）=64个小方格细胞总数/ 4 ×10*4 × 稀释倍数。总细胞数就为= 细胞个数（每1mL） × 细胞悬液的体积。