有一已知序列(1516bp)的基因,现在想要克隆这个基因,请问引物怎样设计?能不能直接克隆出全长?还有就是,一般所说的启动子,终止子在什么位置?如果要设计酶切位点的话该怎么办?我是菜鸟,刚接触这块,下面是这个序列:5'GGCACGAGGAT

问题描述:

有一已知序列(1516bp)的基因,现在想要克隆这个基因,请问引物怎样设计?能不能直接克隆出全长?还有就是,一般所说的启动子,终止子在什么位置?如果要设计酶切位点的话该怎么办?我是菜鸟,刚接触这块,下面是这个序列:5'GGCACGAGGATTCAATTCAATACGAAACTTATCTCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAATTCAATACGAAACTCCATTTTTAATTTATTATTGGTCAGTTAAATTTGAGGTGAAATTATCCACCCCCATTTTTGACTCACTTGCGTTGTAGCCGAATTTCAAAAATGGTAGAATCAACAACAACCCAGATGAATTAGTGAGCGAAAAATCGAAGATATTGCTTATCCAATAGTAAAGATTCAATTTTTAGTGCATTAACAACAATGGGTTCTGGAGAAATAGCTTCTTCATCTGGAAACACTAACGTTTCTAGCTCAGGGCTTATTGAAAAGCACCAATTGGAGCTAGACAATTTGACACTAACCACACAACCCTTCAAAACACTAAAATTCTTCACATTAGCTATTATTCAATACTTGAAGAAAACAGCAACATATTTGTTGGCCAAAGGTGGATTGCTTATGCTTCTCAGTGTTGTGGTAGGGGCCCTTGGCATAATGCTGATTACGGTTGAAGGTCCTCATGAAAAGCATTTTGAGGAGCTACTTAAATATTTCCGTTTTGGACTATGGTGGATAACCCTTGGGATTGCATCTTCAATCGGTCTTGGGTCTGGTTTGCATACTTTTGTTCTATACCTGGGTCCCCACATAGCATTCTTTACGATAAAAGCCATGCAGTGTGGCCGAGTTGATTTGAAGAGTGCTCCGTATGATACAATACAGTTAGATAGAGGTCCCACTTGGCTTGATATGGATTGCTCGCAATTCGGGCCACCGATGTTTCAGTCAGATCATGGTTCACAGATTCCACTAAGCATCATTTTGATTCAAGTTCAGTTGGAAGCTGTTTTATGGGGTATGGGGACAGCTATTGGGGAGCTTCCTCCTTACTTTATATCCAGGGCAGCACGCTTGTCTGGGAGCAAATTGGATGCAATGGAAGAGTTGGATACTGAAAATGAAGGAATCATCACAACCTACTTAAATCGCATCAAGCGTTGGTTCTTATCACATTGTCATCATTTGAATTTCCTTACCATTTTGGCGCTTGCTTCGGTACCAAATCCTCTGTTTGACCTTGCTGGTATCATGTGTGGACAATTTGGCGTTCCATTTTGGAAGTTCTTTCTTGCGACTTTCATTGGGAAGGCTCTTATTAAAACTCACATACAGACGGTATTTATCATCTCAGTTTGCAATAATCAGCTTCTTAATTGGATAGAGAATGAATTTATCTGGGTTCTTGGTCATATACCTGCTTTTGCTTCTATTTTGCCTAGTGTGATTGCTAATCTCCATGCAGTTAAAGATAAGTATCTGAAAGCACCTCATCAAGTTTCCCCAAAAATAAAGGGGACAAGATGGGATTTCTCAATTGCTTCAATCTGGAACACTGTGGTGTGGCTTATGCTTATGAATTTCTTTGTGAAGATAGTGAATTCAACTGCTCAGAGGTATTTGAAGAAACAACAGGAGATAGAACTAGCTGCATCAAACATTTCTACCTCAACTGATTAG 3'.我的主要目的是想克隆出这个基因,并且验证功能!

一般用primer设计,起始引物以atg开头,终止以taa,tga,tag结尾,不过你要先分析你的引物是不是全部能够翻译成蛋白质,不要有中断,否则你就算扩增出来也没用的