胶原蛋白的测定方法和原理 或者说下下面这个实验叫什么方法 和它的原理

胶原蛋白的测定方法和原理 或者说下下面这个实验叫什么方法 和它的原理
5.1 药品配制
5.1.1 硫酸溶液[c(H2SO4)≈3 mol/L]
\x05量取750 mL水于2 L的容量瓶中,在搅拌下缓慢加入320 mL浓硫酸（）.冷却至室温后用水定容.
5.1.2 缓冲溶液（pH=6.8）
将26.0 g一水柠檬酸、14.0 g氢氧化钠和78.0 g无水乙酸钠用500 mL水溶解,转入1 L容量瓶,加入250 mL正丙醇,用水定容.该溶液于4 ℃暗处可稳定保存几周.
5.1.3 氯胺T溶液
称取1.41 g三水N-氯-对甲苯磺酰胺钠盐（氯胺T）,用100 mL缓冲溶液溶解,临用前配制.
5.1.4 显色剂
称取10.0 g对二甲氨基苯甲醛,用35 mL高氯酸溶液（质量分数60%）溶解,缓慢加入65 mL异丙醇.临用前配制.
5.1.5 羟脯氨酸标准溶液
\x05标准储备液：称取50 mg 4-羟基-α-吡咯甲酸（羟脯氨酸）于100 mL 容量瓶中,用水溶解,加一滴硫酸溶液,用水定容.该溶液4 ℃下可稳定存放1个月.
\x05标准工作液：移取5.00 mL上述标准储备液至500 mL容量瓶中,用水定容.分别吸取该溶液10、20、30和40 mL于100 mL容量瓶中,用水定容,所得标准工作液浓度依次为0.5、1.0、1.5和2.0 .临用前配制.
5.2
5.2.1 样品前处理
\x05将鱼皮流水解冻,去除多余碎肉及脂肪,清洗干净,吸油纸吸去表面水分,剪碎.
5.2.2 样品水解
\x05精确称取4 g鱼皮放入烧瓶中,避免粘在烧瓶壁上,加入30 mL硫酸溶液,用表面皿盖住,在105 ℃干燥箱内恒温16 h.
\x05用圆形滤纸趁热将水解产物过滤至250 mL容量瓶中,用10 mL硫酸溶液分三次洗涤烧瓶和滤纸,合并至上述容量瓶,用水定容,摇匀.用移液管移取10 mL该水解液至250 mL容量瓶中,定容摇匀.
5.2.3 测定
\x05移取4.00 mL上述溶液于比色管中,加入2.00 mL氯胺T试剂,混合后于室温下放置20 min.
\x05加入2.00 mL显色剂于比色管中,充分混合,用塑料薄膜将比色管封口,迅速放入60 ℃水浴中加热20 min.
\x05取出比色管,流水冷却比色管至少3 min,室温下放置30 min.
\x05用水做参比,于558 nm处测吸光值.平行两组.
\x05用蒸馏水代替稀释溶液做对照实验.
5.2.4 标准曲线
\x05用4.00 mL羟脯氨酸标准工作液一次代替稀释后的水解产物,进行同样操作；
\x05以扣除了空白吸光值的标准工作液的吸光度为纵坐标,以相应的浓度为横坐标,绘制标准曲线.