定量PCR试验,模板、引物都一样,只是mix分别用2家公司的,熔解曲线都是单峰,但峰值却相差2-3度,为什么
问题描述：
定量PCR试验,模板、引物都一样,只是mix分别用2家公司的,熔解曲线都是单峰,但峰值却相差2-3度,为什么
答
mix中镁离子含量、缓冲液组成等等都是可以影响到溶解曲线出峰值的.这个和Tm的影响方式差不多.但是引物是一样的，那么我所扩增的片段也是一样的，一段特定序列它的熔解温度Tm值是一定的，那么熔解曲线也应该是一样的，怎么会不同呢，谢谢。谁说Tm一定是一样的，算Tm值的时候软件还要输入离子强度呢，你打开你的引物设计软件好好看看。公司所带的RT引物设计软件可能没有，因为这个Tm值是与该公司的MIX是配套的用Primer5设计引物的时候，引物设计好了就有一个Tm值呀，没输离子强度呀那是因为离子强度是默认值你再找点文献看看Tm值和什么有关吧