用SDS-PAGE测出目的蛋白的分子量后,怎么进一步分离~给个思路就好我们用SDS-PAGE测出了麦清蛋白的分子量,然后怎么样利用这个结果来设计下一步的分离?如果测目标蛋白的分子量是为纯化提供理论数据,该怎么利用?改用PAGE的话还找得到目标蛋白吗? 而且对于分离量大的话电泳应该有局限。凝胶层析应该在数量和质量上都能达到要求,那么能通过分子量来确定使用的凝胶孔径吗? 密度梯度离心的话精度不够吧?

问题描述:

用SDS-PAGE测出目的蛋白的分子量后,怎么进一步分离~给个思路就好
我们用SDS-PAGE测出了麦清蛋白的分子量,然后怎么样利用这个结果来设计下一步的分离?
如果测目标蛋白的分子量是为纯化提供理论数据,该怎么利用?改用PAGE的话还找得到目标蛋白吗? 而且对于分离量大的话电泳应该有局限。凝胶层析应该在数量和质量上都能达到要求,那么能通过分子量来确定使用的凝胶孔径吗? 密度梯度离心的话精度不够吧?

Gel-Filtration,选择合适的胶

1,选适合的凝胶
2,电压调低
3,最好尝试下无SDS的丙烯酰胺电泳,看下电荷的携带量上有无差异,大的话可以以此来分离
4,可以根据离心对照表来离心
5,分子量差异大,数量多的话可以选过膜或过凝胶层析柱