跑total RNA urea page 用多大浓度的胶?
问题描述：
跑total RNA urea page 用多大浓度的胶?
浓度和电压求详细告知啊
答
以biorad mini protean III为例.
8M urea,0.5xTBE,5%(1:19)bis-AA:AA.取10ml于15ml falcon tube,平衡到室温或37度.
加入100ul 10% AP(过硫酸铵),4ul TEMED,颠倒混匀一分钟.
倒胶,插梳子,置于阳光下一个小时.
将300ml 0.5xTBE 预热到60度.
卸胶,取梳子,用ddH2O冲洗梳孔,用滤纸吸干孔内余液.
上电泳槽,用预热好的TBE进行预电泳,250v,20min.
PAGE Loading buffer:80% deioned formamide,10mM EDTA,BPB & XCY.
将样品5ul 与5ul loading buffer 混合,70度五分钟.冷至4度,立即上样.
预电泳完毕,用1ml枪吹打PAG胶上样孔之urea,立即上样(不超过5ul,100ng-1ug).
250v电泳15-20min,至BPB正好走出.
卸下玻璃板,以ddH2O冲洗至温度降至室温.卸胶.
染色,EB or SYBR gold or gelstar or silver stain.