DNA跑胶具体步骤?

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• DNA分子克隆与PCR扩增DNA的区别T载体是克隆载体,能把目的基因片段转染到大肠杆菌扩增,但不表达.我新手弱弱的问一句为什么不直接把目的片段拿去跑PCR就行了,干嘛要用克隆载体去获得大量目的基因片段呢?
• rna提取的OD260/280是2.0左右,但总是跑不出条带,下面要做rt-pcr,怎么改进啊,用天泽的盒子提取的rna,测得OD260/280=2.06,浓度65ng/ul 提了好几次都是2.0左右,但一直跑不出rna条带,倒是有dna带,下面要做rt-pcr,我是新手,第一次提的时候是有rna的,不过条带拖尾厉害
• 梯度PCR疑惑请各位帮帮忙我做梯度升温PCR,从55度到62读的升温,两引物的Tm值相差2度,算的平均值为62度,跑胶后,都跑有目的条带.55度条带最亮,其它亮度较淡且差不多.之后我用55度的退火温度,用第一次的PCR产物做模板进行PCR,跑胶什么都没有,这是怎么回事啊?难道产物降解了?（第一次产物我存于4度.可是再做第一次产物的跑胶还是有条带啊）或是其它原因?）
• 用革兰氏阳性菌做菌落PCR时,怎样处理菌体模板?如题,本人刚刚开始做分子生物学方面的研究,因为大家都知道G+的胞壁比G-菌比如E.coli的要厚些,所以要在PCR之前要对模板进行一定的处理,但是怎样处理才好?我上次做的时候就挑去单菌落（猪链球菌2型）溶30微升水后用95°处理10min,然后取了5微升做模板加到PCR体系里去了,做完PCR跑胶检测的时候没有带,我觉得是我在处理模板的时候没处理好导致的,因为其他试剂都是刚买的,请各位有经验的指点一下我这个新手,步骤最好说的详细一些,
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• 求!>=500kda的蛋白电泳,5%分离胶要多大电压跑多久啊?我做过220v跑七个小时,貌似都没有.
• 英语翻译1.其他时候会不会有mRNA从细胞核里出来?2.被转录出来的mRNA一定会通过核孔全部出来吗?3.转录翻译在细胞中是时时进行着的吗（除正在分裂期的细胞）?4.mRNA会从细胞里'跑"出来吗?DNA会从细胞里“跑”出来吗?
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