求做染色质免疫共沉淀的原理和大致步骤

问题描述:

求做染色质免疫共沉淀的原理和大致步骤

利用识别特定蛋白的抗体,捕获与此蛋白相互作用的核酸.特定蛋白多半是能够与核酸结合的,转录因子,调控原件等等,而抗体可以是识别不同修饰的蛋白,例如乙酰化什么的,用于转录调控,表观遗传学研究等等

  1. 抗体挂到固相支持物上(磁珠或琼脂糖),制备亲和纯化柱

  2. 对细胞进行甲醛交联,固定蛋白与核酸的结合物

  3. 将蛋白核酸复合物抽提出来,再将染色质片段通过超声或酶解,打断成小片段

  4. 将此小片段加到制好的亲和纯化柱上孵育

  5. 将未结合物质洗去

  6. 将目标蛋白核酸复合物洗脱收集

  7. 蛋白酶K加热解交联

  8. 纯化核酸

  9. 根据需要进行qPCR或者是测序,芯片等


如何构建过表达载体?